ABI PCR儀器常見故障維修的原因:
有很多可能性。這些錯誤的來源通常仍然不明。任何故障排除過程的先檢查協議并重復實驗。檢查方案并請有經驗的分子生物學家審查實驗計劃很重要。一位博士后研究員的告誡故事是,在意識到ABI PCR主混合物中缺少dNTP之前運行了幾次失敗的PCR,這提醒我們,即使是精疲力盡的科學家也容易受到簡單錯誤的影響。
反應組分的預混料中的錯誤或問題可能是所有樣品和陽性對照擴增失敗的災難性原因。重復實驗之前,請檢查所有組分及其濃度。如果正在使用新一批試劑,則在進行一系列主要實驗之前,對新舊試劑進行對比。
切換母料產品時,必須認識到某些分析方法對緩沖液成分/退火溫度(T a)/引物濃度組合特別敏感。更改其中任何一項可能會導致不同的性能。因此,在進行徹底更改之前,請驗證所選主要混合物中和所有所需儀器上的所有測定法。查看每種預混液隨附的說明也很重要,因為它們指定了針對給定酶,熱啟動機制和緩沖液成分優化的推薦條件。

ABI PCR儀器熱循環儀故障維修:
儀器故障可能會起隱患,因此難以診斷。為避免昂貴的維修費用,請確保所有儀器操作員都經過全面的培訓并受到的監督。一些儀器故障會導致災難性故障,從而導致沒有放大或熒光數據,而另一些儀器故障會使數據失真或以不均勻的方式處理樣品,從而在相同的生物樣品之間造成人為的差異。將對照樣品與對照測定結合使用對于排除故障非常有用。當懷疑儀器出現故障時,應在所有孔中進行可靠,優化的測定。這種一致性檢查將揭示特定于儀器區域的問題以及單獨的測定和儀器問題。

ABI PCR儀器探針檢測失敗維修解決:
設計了基于探針的測定法來檢測人cDNA樣品中的EIFB1,但未顯示擴增。初始反應在ABi StepOne儀器上使用兼容的試劑進行。嘗試使用200 nM至900 nM的濃度范圍優化引物,但沒有改善。檢驗設計經過驗證,發現適合于靶標,并且計算機模擬地預測這是一種高質量的檢驗。合成了新的引物,并使用不同的算子SYBR Green I試劑(因此試劑也有所不同)和儀器(Eppendorf Realplex)與原始合成的等分試樣一起運行。在采用這種方法時,我們注意到主要目標是解決問題,而次要目標是解釋失敗。該反應從兩批引物產生了相等的擴增。在這個階段就顯得反應問題鋪設用探針,并因此新的探針合成和兩個批次是通過在realplex實時儀器第二運營商使用LuminoCt相比®試劑(不同的試劑的那些試圖)。兩種探針均產生擴增數據,盡管值得注意的是,原始探針已在測試實驗室之間張貼,因此在室溫下在溶液中放置了幾天,但新探針似乎比原始探針稍好。在這個階段,很顯然,當由LuminoCt第二操作運行原始和更換試驗都起作用®在realplex實時熒光定量儀試劑。因此,原始失敗的其余原因被認為是:
操作員:一位經驗豐富的科學家對該實驗進行了多次重復,因此,這被認為是不太可能的解釋。
儀器:可能因為其他檢測方法失敗而出現問題。
試劑:測試簡單的解釋。該LuminoCt 試劑相比,使用在ABI StepOne擴增儀兩個寡批。反應未能與原試劑,但得到了良好的擴增,LuminoCt ®試劑


